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    原代心肌細胞間的培養是為了什么?

    更新時間:2022-01-11點擊次數:1413
      原代心肌細胞間作為主要研究模型廣泛應用于心血管研究,經過長期的嘗試,我們實驗室找到了一些行之有效的方法,積累了一些經驗??偨Y如下:
      1、細胞分散和接種均勻度
      分離出來的心肌細胞在溶液中Ca2+的作用下容易結塊,因此,在差動貼壁前后,應將心肌細胞輕輕吹吹多次,形成單一分散狀態。接種后,心肌細胞應均勻分布在培養板上避免細胞聚集到培養孔中心另外,將培養板放入培養箱后,用滴管輕輕吹每個孔中心部分2~3次,但要特別注意避免污染。

     

    原代心肌細胞間
     

     

      2、成纖維細胞的抑制和血清類型的選擇
      成纖維細胞比原代心肌細胞間更容易貼壁,具有分裂和增殖的能力。差異粘附后,少量成纖維細胞仍混合在心肌細胞中。如果處理不當,它們很容易長成優勢細胞溴脫氧尿苷(BrdU)會干擾細胞有絲分裂,因此BrdU通常用于抑制成纖維細胞的生長,但如果使用胎牛血清培養細胞,則很難BrdU*抑制成纖維細胞的生長,因為胎牛血清中含有許多促有絲分裂因子,使用小牛血清可以克服這種現象,獲得90%以上的心肌細胞。
      3、換液時間
      觀察原代心肌細胞間形態時,接種密度低,貼壁心肌細胞數減少。為避免因更換溶液而丟棄有活力的心肌細胞,接種后48小時應更換溶液,這樣不僅貼壁心肌細胞數量明顯增加,而且BrdU的作用時間更長,對成纖維細胞的抑制作用更明確此外,其與0.1g?L1BSA對心肌細胞黏附率和凋亡率無顯著影響。
      4、防污染措施
      除無菌操作等常規技術方法外,還應特別注意以下幾點:(1)取心時避免切開消化道較安全的方法是切入劍突上肋,不涉及腹腔,減少污染機會(2)條件允許的情況下,新生大鼠心肌細胞不應與其他細胞在同一培養箱中共培養,以防止交叉污染(3)培養的心肌細胞的觀察和拍照每次時間過長,否則不僅會改變培養基的pH值,還會增加污染的概率。
     
     
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